选择狂犬病疫苗毒种的基本原则，首先应是固定毒，而且必须是第1血清型的狂犬病病毒，任何候疫苗候选毒株都必 须有详细的传代历史记录，必须能诱导机体产生抗街毒感染的保护作用。种子病毒应相对稳定，主种子病毒在传10代内可以使用；必须满足的基本条件：1.毒种 应维持一致的表现，如接种在特殊细胞基质上的细胞病变或是噬斑的特征、抗原性，以及以特殊途径接种动物后能引出满意的抗体应答；2.该毒株必须能被标准的 抗狂犬病病毒血清所中和。

一、我国使用的生产毒种

（一）aG株：是我国现用的疫苗生产毒株，来源于北京株，该毒株于1931年由北平卫生事务所袁浚昌先生从捕杀的狂犬脑组织分离，经当时的中央防疫处技术 人员在家兔脑内连传50代所得的病毒（减毒经过见表4-6-3），命名为北京株狂犬固定毒。于1980年以前，我国曾此毒株作为羊脑疫苗的生产毒株。

北京株在经家兔脑内再传100代后，于1965年开始，由武汉生研所等单位用此固定毒株通过地鼠肾细胞适应传代，传至68代时获得一株既能适应于原代地鼠 肾细胞，又具有与北京株固定毒免疫原相似的组织培养毒株，称为a系株。a系株的前10代在组织培养中的产毒高峰在30天，毒力滴度为 3.5lgLD50,11～36代产毒高峰缩短至15天，到44～68代时为5天，其毒力滴度为4.5lgLD50,用a系55代毒株感染豚鼠脑所得的毒 种称为aG株, aG株经感染豚鼠脑与单层细胞培养交替传代，获得毒力较稳定aGT种子株。经小动物和大动物（狗、猴）外周神经感染与中枢神经致病试验，结果表明aGT经 外周神经感染致病率比原固定毒北京株大大降低，而北京株仍保留20～30%的致病力。脑内感染的犬脑组织切片，北京株所致的重度病理变化比率为64%，而 aGT为15%；北京株所致的轻度病理变化占9%，而aGT为50%；故认定其外周神经致病性几乎完全丧失。

以aGT为毒种制成试验疫苗，经皮下免疫狗、猴，其7、14、21、30天所产生的中和抗体滴度大大高于羊脑疫苗和北京株对照组。嗣后，此疫苗经大面积人 体临床试验，结果表明能完全保护被疯动物咬伤的人体。此后我国全部使用此aGT毒株作为细胞疫苗生产毒种。

（二）CTN株：该毒株于1957年分离自山东省淄博市死于狂犬病患者脑组织。在小鼠脑内连续传代，当传至56代时(即CTN-M株)小鼠发病潜伏期从 11-14天缩短为3-6天，皮下致病力下降2.7lgLD50。其后CTN-M株又通过人胚肺二倍体细胞株连续传代共100代；当传至37代左右，其病 毒滴度提高了3.0～5.0lgLD50，命名为CTN-1-37。

1994年，将二倍体细胞适应株CTN-1-7适应于Vero细胞，连续传代30代，第1代的毒力即可达到107 LD50/ml，25代以后毒力可达107.5 ～108.0 LD50/ml。脑内接种后的病理切片无包涵体，对家兔肌肉、脑内注射均不致病，对豚鼠、裸鼠、乳狗进行肌肉包括近神经部位接种均不致病。小鼠连续感染3 代，潜伏期均为6天；未发现毒性逆转现象。免疫学交叉试验结果显示：用aG株免疫血清中和后进行免疫原性试验，结果中和指数为1.7×105 LD50。CTN-l株与aG株的抗原性一致，且比CVS株更密切。

用该毒种制备的实验性犬用活疫苗，经口服和肌注免疫接种41715头犬，未发现疫苗株的致病性，免疫效果和保护力良好，孕犬口服活疫苗无垂直感染。犬口服 30天后中和抗体可达2.59IU/ml，阳转率100%。35～60日龄乳犬口服1O个剂量的活疫苗，在3个月内的各时期分别杀犬取脑及唾液腺，分别在 BHK-21细胞和小白鼠脑内盲传2代进行病毒分离，结果均为阴性。证明该毒株已充分减毒，显示安全有效。

1982年获卫生部同意将此毒种扩大使用。l984年，WHO狂犬病专家委员会第七次报告中，将我国CTN-l株认可为狂犬病病毒固定毒株，列为可用于生产疫苗的病毒株。

二、国外使用的生产毒种

（一）适应于鸡胚细胞培养的毒株：

最有代表性的、适应于鸡胚细胞培养的毒种是Flury毒株，1940年Koprowski从因狂犬病死亡的女孩脑内分离的病毒称之为Flury毒株，将此 毒株连续在1日龄雏鸡脑内传138代，消除了其入侵唾液腺的能力；随后又在鸡胚卵黄囊传40～50代，又降低了其对外周神经的嗜性，对狗不致病，称之为低 代次鸡胚细胞培养适应毒株，简称为鸡胚低传代株（low egg passage，LEP）。其后，再在鸡胚传178代以上，至此，该毒株无论在神经内外接种都丧失了对动物的致病力，但对新生乳鼠和猴进行脑内接种仍有感 染性。现在人们将68代之前的毒株称为LEP，136代之后的毒株称为鸡胚高传代株（high egg passage，HEP）。

1.日本制造的原代鸡胚细胞疫苗毒株就是来源于 Flury-HEP，Yoshino于60年代初,作1日龄鸡胚适应传代，最后由近藤将此毒株适应于原代鸡胚成纤维细胞，经多次选育出可作为疫苗的种子毒株。

2.德国 Behring厂制造的原代鸡胚细胞培养精制疫苗所用的毒株为 Flury-LEP毒株，毒种来源于美国 ATCC提供的鸡胚第59代，适应于原代地鼠肾细胞共90代，以及适应于人二倍体细胞 WI-38共12代，其后再适应于原代鸡胚细胞。在原代鸡胚细胞适应的第25代(称 LEP-C25)作为人用疫苗的主种子毒。

（二）适应于传代细胞培养的毒株：

1. 适应于人二倍体细胞系的毒株：毒种为Pitman-Moore株(简称PM株)，是固定毒，来自Pasteur株(简称PV株)。Wistar研究所从 1960年起筛选毒种，1962～1963年将此毒种适应于人二倍体细胞系 WI-38，共传52代(在1964年以前制备的疫苗，其毒种代次水平为47代)。并于52代作为种子毒。病毒滴度可达到10-6.7LD50／ml。

2. 适应于Vero细胞系的毒株：毒种来源于Wistar的PM株，简称Wistar株。由法国Merieux研究所将Wistar株适应于Vero细胞系和人二倍体细胞系MRC-5，称为PM1503 3M株。

3. Evelyn-Rokitnicki-Abelseth 毒株(简称ERA株)：1984年加拿大的Pasteur- Merieux-Connaught公司使用此毒株用于生产人二倍体细胞疫苗。

PV株繁衍谱系，在兔脑内传代大于1500代；1940年Habel将PV株引入美国。Wistar研究所从NIH获得PV-11株，经两代兔脑传代，在 WI-38细胞传47～52代作为主种子毒，称为PM株。1966年再转至Merieux研究所，Merieux研究所将其经兔脑传代并适应于Vero细 胞系和人二倍体细胞系MRC-5。目前PM株已经适应于三种不同的细胞系上。

三、检定用的攻击毒株

攻击用毒株一般采用challenge virus standard (CVS) 株。CVS株来源于PV株，它有许多亚系，例如CVS-11、CVS-24、CVS-27、CVS-F3等。CVS-24株是高神经致病性的野型 （neuropathogenic wild-type）毒株，它适应于小鼠脑内传代；现是疫苗检定用的标准攻击毒株。

四、兽用疫苗所使用的毒种

1.SAD(Street-Alabama-Duffering)候选毒株及其衍生毒株，1935年在美国Alabama州从疯狗脑中分离到的一株狂犬病 街毒，经小鼠脑传代成为固定毒；再经原代地鼠肾细胞、鸡胚、牛肾细胞和猪肾细胞传代后，成为疫苗候选毒株，简称为SAD株。SAD株再经猪肾细胞传 35～45代，称为ERA株。如果SAD株再经原代地鼠肾细胞在32℃条件下培养传40～107代，成为疫苗候选毒株Vnukovo-32。

（SAE克隆株是来自SAD B19株，通过蚀斑克隆、小鼠接种和在BHK-21细胞获得的。SAE株：含11928个核苷酸；其中含有5个结构基因，从3’端起，依次为 核蛋白基因含1353个核苷酸、非结构蛋白（NS、或称P、M1）基因含990个核苷酸、基质蛋白（M2）基因含803个核苷酸、糖蛋白基因含1575个 核苷酸、大蛋白（L）基因含6474个核苷酸。）

2.减毒PV株。

3.其它减毒疫苗株：SAD B19株、Flury-HEP、SAG1、SAG2株（21），均为通过动物或细胞传代突变获得的口服疫苗毒株。